Коли-титр

ПОИСК

Коли-титр
    Коли-индекс Пределы индекса (доверительные границы) Коли-титр [c.395]

    Показателями загрязненности воды служат коли-титр и коли-индекс. Наименьший объем воды в миллилитрах, содержащий одну кишечную палочку, называют коли-титром, количество кишечных палочек в 1 л воды — коли-индексом. [c.186]

    Пригодность воды к использованию Коли- титр Коли- индекс Пригодность воды к использованию К ЛИ -титр Коли- индекс [c.198]

    Коли-тест 1000 КОЛИ-ТИТрУ [c.19]

    Коли-титр, не менее 300 [c.12]

    Анализ водопроводной и чистой природной воды проводят после предварительного концентрирования воды на мембранных фильтрах. Результаты выражают в виде коли-индекса — числа бактерий в 1 л воды. Иногда делают пересчет, определяя коли-титр — наименьшей объем воды (в мл), содержащий одну кишечную палочку. Коли-титр = 1000/коли-индекс. [c.37]

    Коли-индекс или коли-титр (как показатель фекального [c.120]

    В хозяйственно-питьевой воде по нормам ГОСТ 2874—73 допускается содержание не более 3 кишечных палочек в 1 л (коли-титр более 300, коли-индекс не более 3) и не более 100 микробов (всех видов) в 1 мл водные ор1 а-низмы должны отсутствовать. [c.197]

    Результаты анализа выражаются количеством клеток кишечной палочки в пересчете на 1 л жидкости (коли-индекс) или наименьшим объемом воды, содержащим одну клетку кишечной палочки (коли-титр). [c.55]

    Бродильный метод — посев воды в глюкозо-пептонную среду (Эйкмана) для накопления микробов группы кишечной палочки к установления их присутствия в воде. Результаты анализа выражаются в виде коли-титра, т. е. наименьшего объема воды в миллилитрах, содержащего кишечную палочку. [c.121]

    В соответствии с ГОСТ 2761—57 пригодным для водоснабжения только при хлорировании считается такой источник, в 1 л воды которого среднее количество кишечных палочек (коли-индекс) составляет 1000 клеток (коли-титр 1,0), а при полной очистке и хлорировании — 10 ООО клеток (коли-титр 0,1). [c.197]

    Показателями загрязненности служат коли-титр и коли-инденс. Коли-титр — это наименьщий объем воды в мл, содержащий одну кишечную палочку. Коли-индекс — количество кишечных палочек [c.290]

    Окисляемость шахтных вод колеблется от 2 до 50 мг/л, а коли-титр от 11 до 0,02. В шахтных водах угольных шахт могут содержаться [c.239]

    Коли-титр = 1000 — Не менее 300 5216—50 Одна кишечная палочка в объеме воды более 300 сж  [c.9]

    Р — количество бактерий в 1 л воды после облучения, или коли-индекс облученной воды, принимаемый [c.211]

    Результаты анализа, как уже отмечалось, выражаются в виде коли-индекса или коли-титра. [c.129]

    Например, из одной пробы воды профильтровано три ее объема — 100 100 и 100 мл. На первом фильтре выросло 8 колоний кишечной палочки. На втором фильтре — 12 колоний и, наконец, на третьем фильтре выросло 10 колоний микробов группы кишечной палочки. Всего профильтровано 300 мл воды выросло 30 колоний микробов, следовательно, коли- индекс равен (1000 X 30) 300= 100, а коли-титр — 1000 100 = 10. [c.134]

    При анализе воды грунтовых колодцев вследствие больших колебаний количества кишечных палочек с целью экономии времени, фильтров и питательных сред С. Л. Петрович предлагает фильтро вать воду в объемах 300,0 30,0 3,0 и 0,3 мл.

При этом колонии, выросшие на фильтрах, не подсчитывают, а ограничиваются указанием наличия или отсутствия роста кишечной палочки в каждом профильтрованном объеме воды. Учет коли-титра в данном случае производят, пользуясь табл.

23 (ГОСТ 5216-50), приведенной ниже. [c.135]

    Учет результатов анализа производится в соответствии с таблицами расчета коли-титра и коли-индекса, составленными на основании математической теории вероятности. [c.139]

    По окончании анализа в таблице, по схеме которой производился посев воды, находят графы, соответствующие полученным результатам, и определяют, какому коли-титру и коли-индексу эти результаты отвечают. Для иллюстрации остановимся на некоторых частных случаях. [c.139]

    Правило пользования табл.

23 при схеме посева 4 объемов по 100 -ил и 10 объемов по 0 мл (общий объем 500 мл) следующее на месте пересечения вертикального левого ряда (количество положительных объемов по Омл), например 5, с горизонтальным верхним рядом (количество забродивших сосудов по 100 мл), например 2, находят значение коли-индекса — 20 и коли-титра — 50 и т. д. Найденные показатели и заносят в журнал анализов. [c.139]

    Расчет коли-титра для воды артезианских скважин и водопровода г. Москвы [c.139]

    Расчет коли-титра для воды водопроводов и грунтовых колодцев [c.140]

    Расчет коли-титра для воды шахтных колодцев и открытых водоемов [c.140]

    Чтобы получить объемы исследуемой воды менее 0,1 мл, предварительно готовят из нее десятикратные разведения в стерилизованной (в автоклаве) литьевой воде. С этой ц ью устанавливают в. штативе ряд пробирок, с 9 жл стерильной воды.

Затем из пробы воды, доставленной для исследбвания после-тщательного перемег шив ния отбирают 1 мл и вносят ее в первую (слева в ряду) пробирку с. 9 мл стерильной воды. При, этом нижний, конец пипетки не должен прикасаться к стерильной воде.

Перемешивание внесенной воды с жидкостью делается другой сухой стерильной пипеткой. Для этого жидкость набирают из нижней части пробирки и выпускают в ее верхнюю часть не менее трёх раз, поСле чего этой же пипеткой набирают 1 мл приготовленного разведения и переносят в следующую в.

ряду пробирку, также не прикасаясь к жидкости. Далее из каждой пробирки после перемешивания, переносят в следующие пробирки с 9 мл стерильной воды по 1 лобщее микробное обсеменение, так и для определения коли-титра испытуемой воды. Схема приготовления разведений приведена на, рис. 19. [c.

123]

    Расчет коли-титра для воды открытых водоемов (рек, озер, прудов и т. д.) Общий объем— 11,11 мл (объемы 10,0 1,0 0,1 и 0,01 мл) [c.141]

    Показателем бактериальной чистоты или загрязненности воды является коли-титр или коли-индекс. Коли-титр равен наименьшему числу миллилитров воды, в котором найдена одна кишечная палочка (Ba t. oli), а коли-индекс – количеству кишечных палочек, найденных в 1 л воды. Бактериологически чистой считается вода, коли-титр которой не менее 300, а коли-индекс равен 0. [c.38]

    Для установления бактериологических загрязнений производится бактериологический анализ сточных вод, которым определяется наличие в воде особого вида бактерий — группы кишечной палочки (бактерии oli ) коли-титр (наименьшее количество воды в м/л, в Kкишечная палочка), коли-индекс (число кишечных палочек в 1 л воды). [c.42]

    В таблице приводятся значения коли-титра и коли-индекса, характеризующих пригодность воды для водоснабм

Источник: https://www.chem21.info/info/1047080/

Коли-титр воды – это наименьший объем воды (мл), в котором обнаруживается 1 кишечная палочка

Коли-титр

Коли-индекс – количество кишечных палочек в 1 л воды.

Установив коли-титр, можно произвести пересчет на коли-индекс. В отличие от других микроорганизмов, кишечная палочка может размножаться при температуре до 45°С, легко сбраживать углеводы с образованием кислоты и газа. Это свойство микроба положено в основу определения коли-титра.

Существует несколько методов определения ОКБ, ТКБ и коли-титра.

Метод мембранных фильтров. Сущность этого метода заключается в концентрировании микробов из определенного объема воды на мембранных фильтрах с последующим выращиванием их на фильтрах на среде Эндо и дифференцированием выросших колоний.

Мембранные фильтры № 3 кипятят в дистиллированной воде, кладут на асбестовый фильтр Зейтца и фильтруют через него определенное соответствующей методикой количество воды (например, питьевой воды – 333 см3, воду открытых источников – в нескольких объемах: 100 см3, 10 см3, 1 см3, 0,1 см3). После окончания фильтрации фильтр захватывают стерильным пинцетом и кладут на поверхность среды Эндо в чашках Петри. Инкубируют в термостате 18-24 ч. При обнаружении на фильтре колоний, характерных для кишечных палочек (темно-красных с металлическим блеском или без него), готовят мазки, окрашивают по Граму, ставят оксидазную пробу. Оксидазной пробой дифференцируют кишечную палочку от других грамотрицательных водных сапрофитов, которые в отличие от кишечной палочки обладают ферментом оксидазой (например, Pseudomonas sp.)

Подсчитывают лактозоположительные оксидазоотрицательные колонии грамотрицательных микробов, что характерно для кишечной палочки, и вычисляют коли-индекс.

Пример: профильтровано три объема воды по 100 см3. На первом фильтре выросло 3 колонии кишечной палочки, на втором – 5 колоний, на третьем – 4 колонии. Среднее арифметическое (3+5+4) : 3=4 колонии при посеве 100 мл воды, соответственно в 1000 мл – 40 кишечных палочек. Значит коли-индекс равен 40, коли-титр равен 25 (1000 : 40).

Бродильный метод. Сущность этого метода заключается в посеве определенных объемов воды в дифференциально-диагностические среды. При наличии изменений сред, характерных для роста кишечной палочки, пересевают культуру на среду Эндо и проводят ее идентификацию.

В зависимости от водоисточника, проводят посев различных объемов воды. Например, при исследовании воды открытых водоемов – 100 см3,
10 см3, 1 см3, 0,1 см3. Объемы 100 см3 и 10 см3 высевают в колбы или флаконы, 1 см3 и 0,1 см3 — в пробирки.

Для исследования воды бродильным методом используют дифференциально-диагностические среды Кода (с лактозой и индикатором бромтимоловым синим), Хейфеца (с маннитом, розоловой кислотой и метиленовым синим), Кесслера (с лактозой и генцианом фиолетовым), Булира (с маннитом и нейтральным красным с поплавком). Посевы воды культивируют в термостате при 37°С или при 44°С в течение суток. Из пробирок и флаконов, в которых отмечено помутнение среды, образование кислоты или газа при расщеплении углевода, производят пересев на среду Эндо бактериологической петлей густым штрихом для получения изолированных колоний. При обнаружении темно-красных колоний с металлическим блеском или без него проводят микроскопию с окраской по Граму и дальнейшую идентификацию кишечной палочки по общепринятой методике.

Результат анализа выражают в виде коли-индекса, который определяют по специальным таблицам. Так, например, при отсутствии роста кишечной палочки во всех объемах воды (100 см3, 10 см3, 1 см3, 0,1 см3) коли-индекс будет менее 9, коли-титр — более 111.

По ГОСТу коли-титр водопроводной воды в городах должен быть не менее 300 (коли-индекс не более 3), в многомиллионных городах коли-титр не менее 500 (коли-индекс не более 2). Вода открытых водоемов считается хорошей при коли-титре 100, коли-индексе 10.

В настоящее время наряду с определением коли-титра в воде проводят также определение титра Enterococcus faecalis. Для этого цельную воду и ее разведения в объеме 1 см3 засевают в одну из жидких элективных сред для энтерококков (щелочно-полимиксиновая энтерококковая среда и др.), а затем проводят идентификацию данных микроорганизмов.

В качестве СПМО воды используют также бактериофаги кишечной палочки – коли-фаги, а также фаги сальмонелл и шигелл. Их обнаруживают там, где есть соответствующие бактерии, к которым эти фаги адаптированы. Фаги выживают во внешней среде более 9 мес.

Они ценны как показатель фекального загрязнения, особенно энтеровирусами, так как фаги выделяются из сточных вод с той же частотой, что и энтеровирусы (например, возбудитель гепатита А человека).

По устойчивости к хлору фаги сравнимы с энтеровирусами, поэтому их считают одним из показателей качества очистки сточных вод.

Коли-фаги – бактериальные вирусы, способные лизировать E.coli и формировать при температуре 370С через 18 ч зоны лизиса бактериального газона (бляшки, негативные колонии) на питательном агаре.

Метод определения коли-фагов в питьевой воде заключается в предварительном накоплении их в среде обогащения на культуре E.coli и последующем выявлении зон лизиса (просветления) газона E.coli на питательном агаре. Метод предназначен для проведения текущего контроля качества питьевой воды.

Предыдущая49505152535455565758596061626364Следующая

Дата добавления: 2014-12-27; просмотров: 3331; ЗАКАЗАТЬ НАПИСАНИЕ РАБОТЫ

ПОСМОТРЕТЬ ЁЩЕ:

Источник: https://helpiks.org/1-125357.html

Определение коли – титра и коли – индекса

Коли-титр

Кишечная палочка— самый многочисленный и постоянный обитатель толстого отдела кишечника человека и всех тепло­кровных животных.

Она выделяется во внешнюю среду с фекальными массами, поэтому используется как индикатор фекального загрязнения внешней среды и косвенный показа­тель наличия в воде болезнетворных микробов — возбудителей кишечных инфекций человека, выделяемых с фекалиями в во­ду и другие объекты.

Таким образом, кишечная палочка служит санитарно-показательным микроорганизмом воды.

Поскольку она не образует спор и гибнет при относительно щадящих методах обеззаражи­вания, её присутствие в консервированных продуктах или воде указывает на нарушение режима консервирования и на недо­статочность обработки воды, так как если кишечная палочка сохранила жизнеспособность, значит, могли выжить и другие неспорообразующие бактерии, такие, как дизентерийная шигелла, брюшнотифозная сальмонелла и другие патогенные бактерии — возбудители желудочно-кишечных заболеваний.

Коли-индекс (индекс кишечной палочки)— эточисло ки­шечных палочек, обнаруженных и 1 л исследуемой воды (по международным стандартам — в 100 мл).

По существующим нормативам коли-титр питьевой воды не должен быть менее 333 мл (в Москве — не менее 500 мл), а коли-индекс — не более 3 (см. 15.1.4.).

Коли-титр определяют методами бродильных проб.Дан­ные методы основаны на способности кишечной палочки теп­локровных животных и человека развиваться при повышенных температурах (43—44 °С) и сбраживать сахара (маннит, глюко­зу и др.) с выделением газа. Существуют двух- и трехэтапные бродильные методы.

Трехэтапный бродильный метод заключается в следую­щем. На первом этапе ставят первую бродильную пробу: различные разведения исследуемой воды при помощи стериль­ных пипеток вносят в колбы и пробирки со специальными уг­леводными жидкими средами (среда Булира, среда Эйкмана, розоловая и др.) и поплавками.

В зависимости от предполагаемого микробного загрязне­ния водоисточника применяют разные схемы посева. Так, при исследовании водопроводной воды делают посевы в общем объеме 300 мл (2 объема по 100 мл и 10 объемов по 10 мл). При исследовании воды открытых водоемов (речной, озерной и т. д.

) не­обходимо посеять воду в общем объеме 111,1 мл (1 объем — 100 мл; 1 объем — 10 мл и по одному объему в 1 мл и 0,1 мл). Соотношение между средой и засеваемой водой должно быть 1 : 2.

Поэтому посевы малых количеств воды (1 мл, 0,1 мл) выполняют в пробирки с разведенной средой (обычной концентрации), а большие объемы воды (100 мл и 10 мл) — в концентрированную среду.

Посевы выращивают в термостате при 43—44 °С в тече­ние 24 ч. При указанной температуре подавляется развитие микроорганизмов, не имеющих санитарно-показательного зна­чения для воды. Затем просматривают посевы для выявления признаков роста кишечной палочки (наличие пузырьков газа в поплавках, изменение цвета, помутнение).

На втором этапе для подтверждения правильности обнаружения роста кишечной палочки в жидкой среде из посе­ва с признаками роста при помощи бактериальной петли дела­ют высев в чашки Петри со средой Эндо и выращивают куль­туру при 37 °С 24 ч.

Среда Эндо состоит из МПА, лактозы и обесцвеченного индикатора (фуксин обесцвечен сульфитом натрия).

На данной среде бактерии группы кишечной палочки теплокровных жи­вотных образуют типичные темно-красные, ярко-красные или розовые колонии с темным центром, имеющие металлический блеск или без него.

Столь характерный рост на среде Эндо этих бактерий обусловлен тем, что они активно сбраживают лактозу, продукты расщепления которой вызывают восстановление ин­дикатора фуксина, окрашивающего колонии. При отсутствии характерного роста на пробу дают отрицательный ответ.

При наличии типичных колоний из них делают мазки, которые окрашивают по Граму и микроскопируют. Если в мазках обнаруживают мелкие неспорообразующие грамотрицательные палочки, то переходят к третьему этапу для оконча­тельного подтверждения результатов исследования.

На третьем этапе из типичных колоний, в которых при микроскопировании обнаружены характерные микробные клетки, делают пересев в разведенную жидкую углеводную сре­ду (Булира, Эйкмана и др.). Посевы выращивают при 43— 44 °С в течение 24 ч, после чего учитывают окончательно.

При наличии в посевах помутнения, газообразования и изменения цвета дают положительный ответ, результаты которого выражают в виде коли-титра. При отсутствии газообразования даёт­ся отрицательный ответ, т. е. данные первой бродильной пробы подтверждаются.

Коли-индекс определяют методом мембранных фильтров. Для этой цели используют мембранные фильтры № 3 (ультра­фильтры) — пористые пленки, изготовленные из микроклет­чатки (нитроцеллюлозы), с диаметром пор 0,7 мкм.

Перед фильтрацией их подвергают стерилизации двойным кипячени­ем в дистиллированной воде в течение 15—20 мин. Затем сте­рильным пинцетом фильтры помешают на предварительно профламбированную поверхность фильтровального прибора Зейтца.

Через фильтр Зейтца проводят фильтрацию под ваку­умом определенного количества исследуемой воды (через один мембранный фильтр — не более 100 мл воды).

По окончании фильтрации освобождают фильтроваль­ную пластинку, частично разбирая прибор. При помощи сте­рильного пинцета фильтр кладут осадком вверх на поверхность среды Эндо, залитой в чашку Петри, плотно прижимая к сре­де. В одну чашку можно поместить 4—5 фильтров.

После куль­тивирования в термостате при 37 °С в течение 18—24 ч подсчи­тывают выросшие на фильтре колонии, характерные для груп­пы кишечной палочки.

Из 2—3 колоний, типично окрашенных и бесцветных, берут материал для мазков, окрашивают их по Граму и микроскопируют с иммерсионным объективом.

Если в мазках присутствуют мелкие грамотрицательные неспорообразующие палочки, из оставшейся части колонии де­лают пересев в пробирки с небольшим объемом жидкой угле­водной среды (среда Булира или др.). Посевы выращивают при 43—44 °С в течение 24 ч. Наличие газообразования — последний показатель присутствия бактерий группы кишечной палочки.

Источник: https://studopedia.su/5_48864_opredelenie-koli---titra-i-koli---indeksa.html

Санитарно-бактериологическое исследование воды – Ф. К. Черкес [1986 Черкес Ф.К., Богоявленская Л.Б., Бельская Н.А. – Микробиология]

Коли-титр

НОВОСТИ    БИБЛИОТЕКА    КАРТА САЙТА    ССЫЛКИ    О САЙТЕ

Исследованию подлежит вода:

1) централизованного водоснабжения;

2) из колодцев различного типа;

3) открытых водоемов (рек, озер, морей);

4) плавательных бассейнов;

5) сточных вод.

Примечание. Пробы хлорированной воды берут во флаконы с дехлоратором (гипосульфитом).

Отбор проб воды. Из открытых водоемов воду берут с помощью специальных бутылей или батометров, снабженных грузилами. Пробу воды рекомендуют брать на глубине 10-15 см от поверхности (так как поверхность подвергается воздействию атмосферных факторов) и на расстоянии 1,5 м от берега (вода у самого берега может быть загрязнена микрофлорой почвы).

Для отбора проб водопроводной воды используют стерильные флаконы вместимостью 500 мл, закрытые ватно-марлевыми пробками и покрытые бумажными колпачками.

Кран предварительно обжигают тампоном, смоченным спиртом, после чего воду спускают в течение 10-15 мин и набирают во флаконы. Заполненные флаконы закрывают стерильными пробками.

Примечание. Исследуют 333 мл воды (табл. 54).

Таблица 54. Эмпирическая таблица ГОСТ 16963-73

В распределительной сети водопровода отбор проб воды осуществляют в зависимости от количества населения, проживающего в зоне обслуживания.

Стандартные методы исследования регламентированы для воды центрального водоснабжения (ГОСТ 18963-73) и предусматривают:

1. Определение общего числа микроорганизмов (в 1 мл исследуемой воды должно быть не более 100).

2. Определение коли-индекса и коли-титра (коли-индекс 3, коли-титр 333 и выше; для Москвы и Ленинграда коли-индекс не более 2, а коли-титр более 500).

3. Исследование по эпидемиологическим показаниям на патогенную микрофлору (патогенных микроорганизмов не должно быть обнаружено).

Определение общего числа бактерий

Согласно ГОСТу 18963-73 общее число бактерий – это то количество микроорганизмов, которое содержится в 1 мл исследуемой воды, способных в течение суток при температуре 37° С образовывать колонии, видимые невооруженным глазом (или при увеличении с помощью лупы).

Первый день исследования

При исследовании водопроводной воды засевают 2 чашки. В одну из них вносят 1 мл неразведенной воды, в другую 1 мл воды, разведенной в 10 раз (т. е. 0,1 мл исходной пробы).

При исследовании более загрязненной воды засевают 1 мл воды, разведенной в 100 раз. Это соответствует 0,01 и 1 мл .воды, разведенной в 1000 раз (0,001 мл) и т. д.

Для получения таких объемов готовят последовательно десятикратные разведения, по 1 мл каждого разведения вносят в чашку и заливают тонким слоем (12-15 мл) растопленного и остуженного до 45° С питательного агара.

Для равномерного распределения исследуемой воды залитые агаром чашки перемешивают путем вращения их. После застывания агара посевы ставят в термостат и инкубируют при температуре 37° С 24 ч.

Второй день исследования

Чашки с посевами вынимают из термостата и подсчитывают число выросших колоний. Учитывают только те чашки, где число колоний находится в пределах 30-300. Если колоний немного, их подсчитывают невооруженным глазом или при помощи лупы.

Если колоний много, то подсчет можно вести с помощью специального прибора для счета микробных колоний (рис. 54).

Рис. 54. Прибор для счета колоний микроорганизмов. 1 – столик для чашки Петри; 2 – игла с пружинным устройством; 3 – показатель счетчика; 4 – тумблер для включения импульсного счетчика; 5 – тумблер для включения лампы освещения счетчика

Подсчитанное количество колоний умножают на разведение и узнают число микробов в 1 мл исследуемой воды.

Определение БГКП

Наличие БГКП (бактерий группы кишечной палочки) является показателем фекального загрязнения, интенсивность которого характеризуют:

Коли-индекс – количество кишечных палочек, обнаруженных в 1 л воды.

Коли-титр – наименьшее количество воды, в котором обнаруживают присутствие кишечной палочки*.

* ()

Для выявления в воде БГКП можно пользоваться двумя методами: титрационным (бродильным) и методом мембранных фильтров.

Титрационный метод

Для исследования воды используют среду накопления глюкозопептонную (ГПС) среду Эйкмана с индикатором и бродильными трубками. Среда готовится концентрированной (в 10 раз) и нормальной концентрации – для посева 1 мл воды.

Первый день исследования

Исследуемую воду засевают по 100 мл в 3 колбы, по 10 мл в 3 пробирки (с концентрированной средой) и по 1 мл в 3 пробирки (со средой нормальной концентрации) – всего 333 мл. Посевы инкубируют в термостате при 37° С 24 ч.

Второй день исследования

Вынимают посевы из термостата и просматривают их.

При наличии помутнения в колбах или пробирках из них производят посев петлей на сектора среды Эндо в чашках Петри. Посевы инкубируют в термостате при 37° С.

Третий день исследования

Вынимают чашки из термостата. Из подозрительных колоний делают мазки. При наличии грамотрицательных палочек ставят пробу на оксидазную активность. Положительная проба на оксидазу дает право дать отрицательный ответ.

Проба на оксидазу. 1-й способ: со среды Эндо снимают петлей 2-3 колонии каждого типа и наносят на поверхность фильтровальной бумаги, смоченной диметилпарафенилендиамином. Положительная реакция характеризуется посинением штрихов, сделанных из колоний.

2-й способ: реактив можно нанести на изолированную колонию на среде Эндо (красная колония – синеет) (рис. 55).

Рис. 55. Определение коли-индекса воды титрационным методом

Отрицательная проба на оксидазу свидетельствует о наличии в воде БГКП. В этом случае вычисляют коли-индекс и коли-титр с помощью стандартных (эмпирических) таблиц ГОСТа 16963-73 (см. табл. 54).

Эти таблицы предусматривают любую возможную комбинацию объемов посева, из которых выделена кишечная палочка.

Метод мембранных фильтров

Для фильтрации воды можно использовать воронку Гольдмана вместимостью 700-800 мл.

Первый день исследования

В воронку смонтированного и простерилизованного фильтровального прибора Зейтца наливают отмеренный объем исследуемой воды. С помощью насоса создают вакуум в приемном сосуде (обычно воду фильтруют через фильтры № 2 и 3).

По окончании фильтрации стерильным или обожженным в огне пинцетом снимают фильтр и накладывают его на среду Эндо в чашке Петри так, чтобы поверхность с осевшими на ней микробами была обращена вверх (на одну чашку можно помещать 3-4 мембранных фильтра).

Посевы инкубируют в термостате при температуре 37° С 18-24 ч.

Второй день исследования

Чашки с посевами (фильтрами) вынимают из термостата. Отсутствие подозрительных колоний дает право дать отрицательный ответ.

Учету подлежат все красные и розовые колонии с металлическим блеском или без него. Из выросших колоний делают мазки, окрашивают по Граму (рис. 56).

Рис. 56. Определение коли-индекса воды методом мембранных фильтров

При наличии грамотрицательных палочек ставят пробу на оксидазу. Положительная оксидазная проба дает право дать отрицательный ответ.

При отрицательной оксидазной пробе производят посев на полужидкую среду с глюкозой и индикатором или на среду ГПС с бродильными трубками – для выявления ферментации углевода до кислоты и газа. При наличии кислоты и газа вычисляют коли-индекс.

Например, на всех фильтрах, находящихся на среде Эндо, выросло 3 колонии, пропущено через фильтр было 300 мл воды.

Расчет. 300 мл – 3 колонии 1000 мл – х х = 10; коли-индекс 10

Примечание. Титрационный метод более точный и может быть использован при наличии в воде примесей. Метод мембранных фильтров экономичнее и дает возможность дать ответ на 2-й день.

Выявление свежего фекального загрязнения

Для определения наличия в воде свежих фекальных кишечных палочек производят посев воды (3-х объемов) на лактозопептонную среду с борной кислотой. Инкубируют при 43° С 24 ч. Наличие кислоты и газа свидетельствует о свежем фекальном загрязнении.

По эпидемиологическим показаниям в воде определяют сальмонеллы, шигеллы, энтеровирусы.

Примечание. Общепринятым дополнительным показателем фекального загрязнения питьевой воды являются энтерококки. При проведении бактериологического исследования определяют все группы энтерококков, хотя санитарное значение имеют преимущественно фекальные стрептококки, обнаружение которых является показателем свежего фекального загрязнения.

Контрольные вопросы

1. Какова основная задача санитарной микробиологии?

2. Что такое санитарно-показательные микроорганизмы?

3. Что такое коли-индекс и коли-титр?

4. Какие Вы знаете методы определения БГКП?

Задание

Определите общее число микробов в исследуемой пробе воды. Среда ГПС (Эйкмана).

Питательные среды

ГПС (Эйкмана) концентрированная. В 1 л воды растворяют 100 г пептона, 50 г хлорида натрия.

Нагревают смесь до кипения, фильтруют, прибавляют 100 г глюкозы, устанавливают рН 7,4-7,6 и разливают по 10 мл в колбы вместимостью 250 мл, по 1 мл в 3 пробирки (концентрированной среды) и по 1 мл в 3 пробирки со средой нормальной концентрации (во всех емкостях среду до нужной концентрации доводят стерильной водой).

Примечание. При исследовании особенно загрязненных вод делают большие разведения (например, 10-6, 10-7 и т. д.).

Источник: http://biologylib.ru/books/item/f00/s00/z0000015/st061.shtml

Тема 12. Санитарно-микробиологическое исследование воды. Определение коли-титра и коли-индекса воды

Коли-титр

Вода является естественной средой обитания многих микроорганизмов. Особую опасность для здоровья человека и животных представляют патогенные бактерии, которые могут содержаться в ней.

Источниками загрязнения воды патогенными микроорганизмами являются выделения больных животных и людей, трупы животных, сточные воды, особенно с предприятий, перерабатывающих животное сырье и др.

Длительность выживания патогенных микробов в воде зависит от их вида, условий окружающей среды и может составлять от нескольких часов до нескольких лет. Так, возбудитель сибирской язвы может сохраняться в воде до 3 лет, возбудитель туберкулеза — до 1 года, возбудитель бруцеллеза — до 100 дней.

Имеется группа болезней, для которых характерен водный путь распространения (паратифы, лептоспирозы).

Таким образом, вода может стать источником распространения инфекционных болезней, возникновения эпидемий и эпизоотий. Для санитарно-бактериологической оценки воды проводят следующие исследования:

1) определение количества МАФАнМ в 1 мл;

2) определение коли-титра (КТ) и коли-индекса (КИ);

3) обнаружение в воде патогенных микроорганизмов проводят по эпидпоказаниям. Для санитарно-микробиологического исследования пробы воды отбирают из источника в объеме не менее 500 мл. Из открытых водоемов их набирают батометром.

Батометр — стерильная емкость с пробкой, в металлическом каркасе и со свинцовым грузилом. На нужной глубине пробку открывают, подтягивая ее за веревочку.

Воду из рек, озер отбирают с глубины 10–15 см от поверхности, а при небольшой глубине — на расстоянии 10–15 см от дна.

Для отбора проб водопроводной воды из крана набирают 500 мл в стерильные колбы с ватной пробкой с соблюдением правил асептики.

Кран предварительно стерилизуют горящим спиртовым тампоном, затем в течение 10 мин спускают воду и только потом берут пробы, которые исследуют сразу или не позднее 2 ч с момента взятия.

Если это невозможно, то их хранят не более 6 ч обязательно при температуре +1…+5_С в холодильнике.

Определение количества МАФАнМ в водопроводной воде. В чашку Петри с соблюдением правил асептики вносят 1 мл водопроводной воды без предварительного разведения, заливают расплавленным и охлажденным до температуры +50_С МПА (методом горячей заливки).

Посевы инкубируют 24–48 ч в термостате при температуре +30_С. После указанного срока приступают к подсчету количества колоний, выросших как на поверхности, так и в глубине агара.

Учитывают только те разведения, при посеве которых на чашках вырастает от 30 до 300 колоний.

При посеве воды без разведений количество бактерий в 1 мл воды будет равно количеству выросших колоний. При определении количества МАФАнМ в воде открытых

водоемов исследуемую воду предварительно разводят стериль –1:10-1 до 1 : 10-4, из двух последних разведений вносят по 1 млв стерильные чашки и заливают расплавленным и охлажденным до температуры +50_С МПА.

После инкубирования притемпературе +30_С в термостате в течение 24–48 ч подсчитывают количество колоний, умножают на степень разведения водыи определяют количество бактерий в 1 мл воды открытых водоемов. Учету подлежат чашки Петри, в которых выросло от 30до 300 колоний.

Колонии считают в каждой чашке отдельно,определяют среднеарифметическое число по двум чашкам. Полученное число умножают на степень разведения исследуемойводы и получают число бактерий в 1 мл воды.

Определение коли-титра (КТ) и коли-индекса (КИ) воды.

Колититромназывают наименьший объем воды, в котором обнаружена одна кишечная палочка.

Колииндекспоказывает число кишечных палочек в 1000 мл воды.

Кишечная палочка является постоянным обитателем кишечника человека и животных, следовательно, ее присутствие в питьевой воде является индикатором фекального загрязнения, поэтому она отнесена к санитарно-показательным микроорганизмам.

Чем выше концентрация бактерий группы кишечной палочки, тем вероятнее присутствие в исследуемой воде патогенных бактерий, таких как сальмонеллы, возбудители дизентерии и холеры.

Показатели КТ и КИ указывают на санитарное состояние воды, ее пригодность в качестве питьевой.

Коли-титр и коли-индекс определяют двумя методами:

1) метод бродильных проб;

2) метод мембранных фильтров.

При исследовании чистой воды удобнее пользоваться методом мембранных фильтров. Если вода содержит механическиечастицы, затрудняющие процесс фильтрации, лучше пользоваться бродильным методом.

Метод бродильных проб.Суть этого метода заключается в посеве определенных объемов исследуемой водыв питательные среды накопления с индикатором и поплавками, инкубации ее при температуре +37_С, с последующим пересевом из забродивших пробирок на среду Эндо, дифференциацией выросших колоний и вычислении коли_титра воды по нормативам.

Данный метод основан на ферментативной способности БГКП расщеплять при помощи ферментов лактозу или глюкозу до кислоты и газа.

Исследуемая вода засевается в различных объемах в глюкозопептонную среду с индикатором и поплавками, при наличии кишечной палочки появляется помутнение, меняется цвет индикатора (желтый цвет переходит в красный) и появляются пузырьки газа в поплавках. Воду методом бродильных проб исследуют в три этапа (три дня):

Первый день.Засевают водопроводную воду в объеме 333 мл (три объема по 100 мл, три — по 10 мл и три — по 1 мл).

При этом вода в объемах по 100 и 10 мл засевается в колбы и пробирки соответственно — с 10 и 1 мл концентрированной ГПС, а посев воды в объеме 1 мл— в пробирки с 10 мл среды с нормальной концентрацией (готовят как концентрированную, но количество всех ингредиентов, кроме воды, уменьшают в 10 раз). Посевы исследуемой воды в средах ГПС культивируют в термостате 24 ч при температуре +37_С.

Второй день.Ведется учет результатов посева разных объемов воды, при котором:

-отсутствие помутнения, образования кислоты и газа в колбах и пробирках после посева воды свидетельствуют об отсутствии кишечной палочки в исследуемом объеме воды;

-помутнение питательной среды, изменение цвета индикатора на красный и появление газа в поплавках говорят о наличии кишечной палочки. Из каждого забродившего посева петлей делают пересев штрихом на агар Эндо, разделенный на сектора в чашках Петри, таким образом, чтобы появились изолированные колонии. Посевы культивируют 24 ч при температуре +37_С.

Третий день.Ведется учет результатов посева на агаре Эндо, при котором:

-отсутствие роста на агаре Эндо или наличие колоний, не характерных для БГКП, говорит о том, что кишечной палочки в посевах нет;

-из колоний, характерных для бактерий БГКП (красных с металлическим оттенком), готовят мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют.

Идентифицируют культуру по оксидазному тесту, положительную реакцию на этот тест дают БГКП, которые не учитываются.

Наличие в мазках грамотрицательных бактерий с отрицательной реакцией на оксидазный тест позволяет дать положительный ответ на присутствие БГКП в исследуемом объеме воды.

Для установления свежего фекального загрязнения делают посев воды в желчно-лактозную среду с бриллиантовым зеленым. Посевы культивируют при температуре +43_С для дифференциации кишечной палочки от хладнокровных, не растущих при такой высокой температуре. Наличие мути и газа указывает на присутствие в воде бактерий — показателей свежего фекального загрязнения.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Источник: https://studopedia.ru/11_86035_tema--sanitarno-mikrobiologicheskoe-issledovanie-vodi-opredelenie-koli-titra-i-koli-indeksa-vodi.html

WikiMedikKonsult.Ru
Добавить комментарий