Антинуклеарный фактор (АНФ)

Что такое анализ крови на АНФ

Антинуклеарный фактор (АНФ)

Иммунная система человека – уникальный слаженный механизм, способный реагировать на любые внешние внедрения патогенных факторов, тем самым защищая организм от целого ряда заболеваний. Но как известно, из каждого правила есть исключения, и в данном случае они выглядят как реагирование иммунитета на собственные клетки, что получило название аутоиммунные болезни.

При данных патологиях идет выработка антител, атакующих здоровые клетки, поражая или уничтожая их. В результате происходит нарушение функционирования отдельных тканевых структур и даже органов. Такие патологии из-за своей распространенности и вовлеченности в процесс нескольких органов или систем получили название системных заболеваний.

При появлении современных методов лабораторной диагностики, одним из которых является АНФ анализ крови на поиск антинуклеарного фактора, позволяющий выявить антинуклеарные (антиядерные) антитела и определить причину патологии. Данный показатель является одним из маркеров системных заболеваний соединительной ткани (СЗСТ), принятым как «золотой стандарт» данного вида исследований.

Основные понятия, характеризующие СЗСТ

Как уже описывалось выше, патогенез данных патологий берет свое начало со сбоев функционала иммунной системы, и выработке защитных антител к определенным компонентам собственных клеток.

Такие клетки за особенность своего происхождения имеют второе название – аутоантитела.

В процессе иммунного сбоя они вступают в контакт с белковыми соединениями ядра, нуклеиновыми кислотами и антигенами цитоплазмы, что приводит к появлению симптомов воспалительных заболеваний, таких как:

  • структурные изменения тканей и органов;
  • выраженное необоснованное утомление;
  • болевые ощущения в мышцах и суставах;
  • поражение кожных покровов;
  • снижение веса тела и другие.

Антинуклеарные антитела (АНА) могут образовываться при довольно обширном спектре аутоиммунных патологий, но наибольшая вероятность их появления при системной красной волчанке (СКВ).

АНФ необходимо сдать при признаках длительного воспалительного процесса

Справка! По статистике, более чем у 90% пациентов, страдающих СЗСТ, определяется патологическая выработка подобных антител. На текущий момент изучено около 200 их видов, которые получили обобщенное название – антинуклеарный фактор. В основном они представлены иммуноглобулинами класса G, но иногда встречаются М или А.

Суть анализа крови на антинуклеарный фактор

Прежде чем углубляться в особенности проведения исследования на АНФ, стоит отметить, что методика была изобретена и начала применяться довольно давно – в 60-х годах прошлого века.

Но широкое распространение в диагностической практике получила лишь в начале 80-х годов XX века после усовершенствования.

В качестве субстрата еще в 1961 году ученый Beck применял клетки лабораторных животных, и только в 1982 году Tan воспользовался перевиваемой клеточной линией человека HEp-2 для поиска АНФ.

Хотя основная цель использования данного теста – это установление диагноза красная волчанка, все же он считается универсальной методикой и для других коллагенозов (СЗСТ). К последним относятся:

Кровь на РФМК – что это?

  • склеродермия;
  • дерматомиозит;
  • узелковый периартериит;
  • хронический активный гепатит и т. д.

Одной из наиболее удобных, и поэтому чаще всего используемых методик для определения в крови пациентов антинуклеарного фактора, считается непрямая иммунофлюорестенция.

Исследование проводится при нанесении сыворотки крови на клетки перевиваемой эпителиоидной линии аденокарциномы гортани человека НЕр-2 (содержащих определенный ряд ядерных антигенов) с применением меченого коньюгата (соединения) с антителами.

Этот выбор сделан неслучайно – клетки НЕр-2 – очень удобный субстрат для изучения биоматериала. Они имеют довольно крупные ядра, и при высадке на лабораторных стеклах растут однослойно. В качестве субстрата можно использовать и другие клеточные линии человека, но удачная морфология и культивирование однозначно делает именно НЕр-2 – незаменимым материалом.

В ходе диагностики при инкубации сыворотки обследуемого с клеточным субстратом, при наличии АНА происходит их соединение с соответствующими нуклеарными антигенами.

Места связки АНФ с НЕр-2 определяются при использовании меченого флюоресцеином (красителем) коньюгата.

Для выполнения оценки результатов произошедших реакций применяется люминесцентный микроскоп, позволяющий дифференцировать характер и степень получившихся связок.

Люминесцентный микроскоп для лабораторных исследований АНФ

Справка! HEp-2 человека, в отличие от тканевых криосрезов животных, имеют более высокую скорость деления клеток, что дает возможность обнаружить антитела к антигенам, которые экспрессируются лишь при делении. Также в субстрате человека отсутствует клеточный матрикс, снижающий качество визуализации изучаемого свечения.

Какие группы антигенов используются при исследовании?

При расшифровке материалов всегда необходимо брать во внимание, что в спектр АНА входит довольно большая группа аутоантител к нуклеопротеидам, рибонуклеопротеидам, гистонам, ДНК и другим структурным единицам ядра. Из этого следует, что функционал теста направлен на выявление антител к составляющим ядра и цитоплазмы, которые изначально были определены при СКВ.

Позже диагностические возможности исследования были расширены, что обусловлено определением подобных антител при других СЗСТ. В скрининговых методиках для обнаружения суммарных АНА, как правило, применяется определенный набор антигенов, принятых за основные маркеры аутоиммунных ЗСТ.

К ним относятся антитела класса IgG:

  • SS-A (Ro) – ядерные рибонуклеопротеины;
  • SS-B (La) – ядерные белки;
  • Scl-70 – белок-фермент (топоизомераза-1);
  • нативная двухцепочная ДНК;
  • RNP/Sm – комплекс антигенов;
  • Jo-1 – фермент РНК – синтетаза;
  • CENP-B (центромера)
  • Hep-2 клетки;
  • митохондрии (PDC).

АНА практически безвредны для организма – они не способны проникать в живые ткани. Но в отдельных случаях могут соединяться в комплексы антиген-антитело, что в результате приводит к структурным разрушениям тканей.

Одним из таких примеров является поражение паренхимы почек при СКВ.

Так как при СЗСТ в процесс вовлечено несколько органов, то выявление АНА не является первостепенно важным для диагностики, а считается лишь подтверждением определенной симптоматики.

Возможности анализа АНФ, выраженные в процентном соотношении

Изучение полученных результатов

После проведения всех необходимых процедур – взятия биоматериала и его лабораторной подготовке к исследованию, проводится оценка и интерпретация результатов.

Сюда входит определение титра (концентрации) антител и типа свечения. Значимым параметром для диагностики является показатель концентрации свыше 1:160.

К примеру, при обострении ревматизма он может превышать отметку 1:640, тогда как в ремиссионном периоде наблюдается понижение до 1:160–1:320.

Тип свечения показывает мишени АНА, что является особо важным клиническим моментом, направляющим последующие действия врача в назначении диагностических мероприятий. По характеру свечения ядер при использовании НЕр-2 определится свыше 20 вариантов ядерного окрашивания, в зависимости от видов присутствующих антител в биоматериале. К основным из них относятся следующие типы свечения.

  • Периферическое. Свечение свидетельствует о наличии анти-ДНК-антител, что подтверждает СКВ. Основным видом антигенов для периферического типа являются гистоновые белки и ДНК.
  • Диффузное (гомогенное). Такое свечение наблюдается при СКВ, сопровождающейся поражением структуры почек и похожих ЗСТ, нефрите, склеродермии, а также лекарственно-индуцированной СКВ. Антигены при данном типе представлены дсДНК, гистонатами и нуклеосомами.
  • Ядрышковое (нуклеарное). Данный тип характерен для системной формы склеродермии, и определяется при присутствии у пациентов антител – PHК полимераза 1, PM/Scl, NOR, U3RNP.
  • Цитоплазматическое. Подобный тип подсвечивания указывает на наличие АНА к тРНК–синтетазам, а именно Jo-1, и наблюдается при полимиозите.
  • Гранулярное. Определяется при синдроме Шегрена, инфекционном мононуклеозе, смешанном ЗСТ (Sharp-синдром, MCTD) и лекарственном волчаночном синдроме. Преимущественно присутствующие антигены для этого типа – SS-A, SS-B, Sm, U1-RNP, и PCNA.
  • Крупногранулярное. Характерно для смешанных ЗСТ и, по мнению многих ученых, связано с наличием антигена RNP.
  • Мелкогранулярное. Определяется присутствие антител, образующихся против рибонуклеиновых белков – АSSP (АЦЦП), SS-A, SS-B и других. Такие антитела характерны для СКВ, также ее специфических кожных формах, ревматоидном артрите, склеродермии, полимиозите, синдроме Шегрена.
  • Центромерное. Данный тип в основном отмечается при склеродермии. Хотя в одном образце крови, особенно у обследуемых с диффузными ЗСТ, в отделенной плазме могут определяться антитела к различным ядерным компонентам.
  • Точечные вкрапления в ядре. Этот тип преимущественно выявляется при болезнях печени аутоиммунного характера. При нем могут сочетаться несколько флюоресцентных типов, к примеру, ядрышковый и мелкогранулярный, что обусловлено антителами к Scl-70.

Справка! Отмечено, что при увеличении разведения плазменного биоматериала параметры свечения могут видоизменяться, так как для многих антител характерна смена активности при разной степени концентрации.

На достоверность полученных в ходе исследования данных могут повлиять всего несколько факторов, способных показать и ложноположительный и ложноотрицательный результат.

Так, неправдоподобные ответы со сдвигом вверх наблюдаются у пожилых пациентов в возрасте от 60 лет (по статистике в 10–37% случаях) и при приеме медпрепаратов, вызывающих лекарственную волчанку (некоторые антибиотики, контрацептивы, сульфаниламиды, тиазидные диуретики).

Отмечено, что у 5–55% особ женского пола, имеющих грудные имплантаты, повышается уровень концентрации АНА. К ошибочной диагностике со сдвигом вниз может привести употребление глюкокортикоидных препаратов – Преднизолона, Метипреда или Дексаметазона.

Источник: https://apkhleb.ru/krov/chto-takoe-analiz-krovi-anf

Антинуклеарный фактор (АНФ) :: описание, нормы, причины, клиники

Антинуклеарный фактор (АНФ)

 Название: Антинуклеарный фактор (АНФ).

Антинуклеарный фактор (АНФ)

 Антиядерный фактор. Лабораторный анализ направлен на выявление различных типов иммуноглобулинов, специфичных для структур клеточного ядра. Показатель Anf увеличивается при системных заболеваниях соединительной ткани. Тест проводится с целью диагностики, дифференциации, контроля лечения и выявления обострений.

Назначается при клинических и лабораторных признаках системной красной волчанки, склеродермии, синдрома Шарпа, синдрома Шегрена, ревматоидного артрита, воспалительной миопатии. Венозная сыворотка крови подвергается методу RNIF. Нормальным показателем является безопасность не более 1: 160.

Сроки подготовки тестовых данных – 8 рабочих дней.

 Основой ревматических заболеваний является аутоиммунная реакция против структур клеточного ядра – белковых комплексов и нуклеиновых кислот. Антигены образуются во время запрограммированной гибели эпителиальных клеток и лимфоцитов.

Ультрафиолетовые лучи, возбудители инфекций, лекарственные препараты ускоряют разрушение клеток, замедляют выведение апоптотических тел, вызывают развитие аутоиммунных процессов.

Антитела, направленные против структур ядра, представлены множеством видов; около восьми в исследовании антиядерного фактора. Преимуществом теста является его высокая специфичность – определяются антитела, которые невозможно очистить для ИФА.

Тем не менее, часть иммунных комплексов извлекается в плазме во время выполнения RNIF, так что существует риск ложноотрицательного результата.

Антинуклеарный фактор (АНФ)

 Изучение антиядерного фактора показано при системных заболеваниях соединительной ткани. Основаниями для проведения теста являются:
 • Симптомы ревматизма. Типичные проявления: лихорадка, усталость, слабость, потеря веса, мышечные и суставные боли, сыпь.

Тест используется для выявления и дифференциации СКВ, склеродермии, синдрома Шегрена, Шарпа, ревматоидного артрита, воспалительных миопатий.
 • Результаты лабораторных испытаний.

Подозрение на ревматическое заболевание возникает с увеличением СОЭ, уровня С-реактивного белка и ЦИК. Тест назначен для подтверждения диагноза.
 • Диагностика ревматизма.

Анализ проводится несколько раз в год (частота определяется индивидуально) с целью проверки течения заболевания, после курса применения иммунодепрессантов, для оценки эффективности терапии.

 Биоматериалом для определения антиядерного фактора является венозная кровь. Процедура забора проводится утром. Правила приготовления следующие:  • Последний прием пищи должен быть сделан максимум за 4 часа. Питьевая вода разрешена в любое время.  • Алкоголь, физические нагрузки, эмоциональные переживания должны быть исключены за день до процедуры.  • Об употреблении наркотиков следует обсудить с врачом. Некоторые лекарства вызывают выработку антител, выработку лекарств от волчанки. На фоне приема глюкокортикостероидов могут быть получены ложноотрицательные данные.  • Инструментальные диагностические процедуры, физиотерапия должна проводиться после сдачи крови.  • Курение запрещено в последние 30 минут перед процедурой.

 В лаборатории сыворотка выделяется из крови. Определение антиядерных антител проводят методом FIT с использованием культуры клеток HEp-2. Титр оценивается по более высокому разведению биоматериала, который выявляет яркость ядерных структур, тип иммуноглобулинов по характеру флуоресценции. Время анализа составляет от 6 до 8 дней.

 Обычно результат исследования антиядерного фактора отрицательный. Название не более 1: 160 для взрослых и детей. При интерпретации окончательного значения учитываются следующие наблюдения:  • Низкие титры ANA снижают риск аутоиммунного заболевания, но не исключают его. В 5% случаев результат отрицательный: тест на антиген SS.  • Получение нормального результата после иммуносупрессивной терапии подтверждает его успех.

 • Отрицательный результат в отношении симптомов аутоиммунной патологии требует дополнительных тестов (NCA, ANA по ELISA).

 Антиядерные антитела не обладают цитотоксическими свойствами, но после их связывания с антигенами образуются иммунные комплексы, которые вызывают воспаление в стенках сосудов. Они проявляются поражениями кожи, почечных клубочков, оболочек суставов, плевры. Симптомы, характерные для системных патологий, развиваются.

По типу свечения с минимальным разбавлением сыворотки определяются возможные заболевания:
 • однородный. Диффузная флуоресценция свидетельствует о наличии антител к ДНК, гистонам. Определяется СКВ и лекарственной волчанкой.
 • периферийные.

Тип свечения обусловлен расположением хроматина, обнаруженного в присутствии Ig к компонентам ДНК, специфичным для СКВ.
 • гранулированный. Антигены представляют собой нуклеопротеиновые комплексы. Свечение неспецифическое, встречается при многих ревматических заболеваниях.

Высокий титр и крупнозернистая флуоресценция наиболее характерны для синдрома Шарпа.
 • ядерный. Отражает наличие Ig, специфического для структур ядрышка. Обнаруживает склеродермию и синдром Шегрена. Редко наблюдается при эндокринопатии, кожных патологиях, пересадках органов.
 • Центромерный.

Антигены являются хромосомными центромерами. Свечение подтверждает ограниченную склеродермию.
 • цитоплазматический. Это обусловлено наличием антител, направленных против тРНК-синтетазы (Jo-1), рибосом и органелл. Позволяет выявить воспалительные миопатии, аутоиммунные поражения печени.
 • митохондриальный.

Антигены являются компонентами комплекса пируватдекарбоксилазы. Люминесценция характерна для первичного билиарного цирроза.
 • Пятно. Связано с циркуляцией антител, направленных против нуклеопротеинов, связанных с аутоиммунными поражениями печени.

 Снижение имеет прогностическое значение при мониторинге системных заболеваний соединительной ткани. Уровень АНА связан с активностью патологических процессов, поэтому снижение их концентрации является признаком ремиссии и успеха терапии.

КлиникаЦенаТелефон
МедиСкан в Домодедово г. Домодедово, Школьный пр-д, д. 1м.+7(929) 910..показать+7(929) 910-90-10+7(926) 910-90-10+7(496) 794-11-55
Юнимед-С на 26-ти Бакинских Комиссаров г. Москва, ул. 26-ти Бакинских Комиссаров, д. 11м. Юго-Западная+7(495) 135..показать+7(495) 135-50-10
МЦ Экспресс на Боровой г. Санкт-Петербург, ул. Боровая, д. 1м. Лиговский проспект+7(812) 712..показать+7(812) 712-24-87+7(962) 686-96-85+7(812) 764-29-72
МЦ Здоровье на Мира г. Санкт-Петербург, ул. Мира, д. 16м. Горьковская+7(812) 306..показать+7(812) 306-27-72
Андреевские больницы в Королёве г. Королёв, ул. Пионерская, д. 30, корп. 9м.+7(499) 519..показать+7(499) 519-37-02+7(499) 519-35-88+7(495) 518-92-70+7(495) 518-92-72+7(495) 518-92-80+7(495) 518-92-81
Поликлиника №220 на Заморенова г. Москва, ул. Заморенова, д. 27м. Краснопресненская+7(499) 255..показать+7(499) 255-54-04+7(499) 252-44-21+7(499) 252-65-07+7(499) 255-00-02
Клиника им. Э.Э.Эйхвальда г. Санкт-Петербург, ул. Кирочная, д. 41м. Чернышевская+7(812) 303..показать+7(812) 303-50-50+7(812) 303-50-00
Клиника имени Петра Великого г. Санкт-Петербург, Пискаревский пр-т, д. 47м. Академическая+7(812) 303..показать+7(812) 303-50-60+7(812) 303-50-00
XXI век на Пограничника Гарькавого г. Санкт-Петербург, ул. Пограничника Гарькавого, д. 15, к. 3м. Проспект Ветеранов+7(812) 603..показать+7(812) 603-70-59
XXI век на Коллонтай 6 г. Санкт-Петербург, ул. Коллонтай, д. 6, корп. 1м. Проспект Большевиков+7(812) 603..показать+7(812) 603-79-65
XXI век на Брянцева г. Санкт-Петербург, ул. Брянцева, д. 13, корп. 1м. Гражданский проспект+7(812) 603..показать+7(812) 603-70-59
XXI век на Коллонтай 4 г. Санкт-Петербург, ул. Коллонтай, д. 4м. Проспект Большевиков+7(812) 603..показать+7(812) 603-79-65
XXI век на Щербакова г. Санкт-Петербург, ул. Щербакова, д. 11м. Удельная+7(812) 603..показать+7(812) 603-70-59
XXI век на Комендантском проспекте г. Санкт-Петербург, Комендантский пр-т, д. 51, корп. 1м. Комендантский проспект+7(812) 602..показать+7(812) 602-71-63
XXI век на проспекте Маршака г. Санкт-Петербург, пр-т Маршака, д. 4м. Гражданский проспект+7(812) 603..показать+7(812) 603-79-65
XXI век на Б. Сампсониевском проспекте г. Санкт-Петербург, Б. Сампсониевский пр-т, д. 45м. Выборгская+7(812) 603..показать+7(812) 603-70-59
XXI век на Б. Пушкарской г. Санкт-Петербург, ул. Б. Пушкарская, д. 20м. Чкаловская+7(812) 603..показать+7(812) 603-70-59
XXI век на Старо-Петергофском проспекте г. Санкт-Петербург, пр-т Старо-Петергофский, д. 39, лит. Ам. Нарвская+7(812) 602..показать+7(812) 602-71-63
XXI век на проспекте КИМа г. Санкт-Петербург, пр-т КИМа, д. 28м. Приморская+7(812) 603..показать+7(812) 603-70-59
XXI век на Гастелло г. Санкт-Петербург, ул. Гастелло, д. 22м. Московская+7(812) 603..показать+7(812) 603-76-04
XXI век в Моравском переулке г. Санкт-Петербург, Моравский пер., д. 3, корп. 2м. Купчино+7(812) 603..показать+7(812) 603-70-59
XXI век на Коломяжском проспекте г. Санкт-Петербург, Коломяжский пр-т, д. 28м. Пионерская+7(812) 603..показать+7(812) 603-70-59
XXI век на проспекте Косыгина г. Санкт-Петербург, пр-т Косыгина, д. 34, корп. 1м. Ладожская+7(812) 603..показать+7(812) 603-70-59
XXI век на Сикейроса г. Санкт-Петербург, ул. Сикейроса, д. 7, корп. 2м. Озерки+7(812) 603..показать+7(812) 603-70-59
XXI век на Марата г. Санкт-Петербург, ул. Марата, д. 48м. Владимирская+7(812) 603..показать+7(812) 603-70-59
МЦ доктора Добродеева на Жукова г. Санкт-Петербург, ул. Жукова, д. 18м. Площадь Ленина+7(812) 493..показать+7(812) 493-79-37
XXI век на Богатырском проспекте г. Санкт-Петербург, Богатырский пр-т, д. 49, корп. 1м. Комендантский проспект+7(812) 602..показать+7(812) 602-71-63
Клиника функциональных нарушений на Габричевского г. Москва, ул. Габричевского, д. 5, корп. 3м. Щукинская+7(495) 152..показать+7(495) 152-58-35+7(495) 363-07-54+7(499) 654-08-00
НДЦ клинической психиатрии на Алтуфьевском шоссе г. Москва, Алтуфьевское шоссе, д. 48, корп. 1м. Бибирево+7(495) 517..показать+7(495) 517-66-55+7(495) 517-66-11
МЦ Здоровье на Лётчика Пилютова г. Санкт-Петербург, ул. Лётчика Пилютова, д. 6, корп. 2м. Проспект Ветеранов+7(812) 306..показать+7(812) 306-27-72
МЦ Здоровье на проспекте Королева г. Санкт-Петербург, пр-т Королева, д. 48, корп. 5м. Комендантский проспект+7(812) 306..показать+7(812) 306-27-72
МЕДСИ в Ступино г. Ступино, ул. Андропова, д. 64м.+7(495) 223..показать+7(495) 223-52-30+7(496) 642-27-45+7(496) 642-37-67+7(495) 152-55-46
ФНКЦ оториноларингологии на Волоколамском шоссе г. Москва, Волоколамское шоссе, д. 30, корп. 2м. Стрешнево+7(499) 519..показать+7(499) 519-39-17+7(499) 968-69-12
ЦКБ №6 ОАО 'РЖД' г. Москва, ул. Шоссейная, д. 43м. Печатники+7(495) 354..показать+7(495) 354-34-02+7(495) 644-47-05+7(495) 644-47-10
МЦ Диона в Молоково Московская область, с. Молоково, Ново-Молоковский б-р, д. 8м. Домодедовская+7(495) 152..показать+7(495) 152-58-54+7(945) 922-92-61
ВитроКлиник в Волоколамском проезде г. Москва, Волоколамский пр-д, д. 1Ам. Тушинская+7(495) 135..показать+7(495) 135-42-92+7(800) 775-07-71
Европейский Институт Здоровья Семьи на Ленина г. Колпино, пр-т Ленина, д. 21м.+7(812) 608..показать+7(812) 608-00-44+7(911) 928-00-45+7(911) 928-00-46
Европейский Институт Здоровья Семьи в Колпино г. Колпино, б-р Трудящихся, д. 35, корп. 1м.+7(812) 608..показать+7(812) 608-00-33+7(812) 460-78-89+7(812) 460-78-61+7(812) 958-46-65
Клиника актуальной медицины на 3-й Фрунзенской г. Москва, ул. 3-я Фрунзенская, д. 10м. Фрунзенская+7(499) 242..показать+7(499) 242-83-65+7(499) 242-83-68
Клиника Здоровья в Мурино Ленинградская область, п. Мурино, ул. Новая, д. 7, корп. 3м. Девяткино+7(812) 617..показать+7(812) 617-00-05+7(901) 301-24-39
Ещё клиник – 252. используйте фильтры

42a96bb5c8a2ac07fc866444b97bf1 Модератор контента: Васин А.С.

Источник: https://kiberis.ru/?p=85694

Антинуклеарный фактор (АНФ) и антитела (АНА): понятие, исследование и показания к нему, причины обнаружения

Антинуклеарный фактор (АНФ)

З. Нелли Владимировна, врач лабораторной диагностики, квалификация по иммунодиагностике

Открытие антинуклеарных антител (АНА), вошедшее в число главных достижений иммунологической науки, дало клинической лабораторной диагностике новые возможности для выявления ряда патологических состояний.

Анализ крови, определяющий антинуклеарный фактор (АНФ), входит в группу наиболее востребованных серологических исследований и находится в числе «золотых стандартов» диагностики аутоиммунных процессов, которые приводят к развитию системной патологии соединительной ткани.

Данный тест при наличии подозрительных симптомов позволяет регистрировать изменения соединительной ткани на самой ранней стадии патологического (аутоиммунного) процесса.

Антинуклерные антитела

Системные заболевания соединительной ткани (СЗСТ) возникают на почве агрессии иммунной системы против собственных антигенов (аутоантигенов), что сопровождается выработкой аутоантител.

Аутоантитела, направленные против растворимых компонентов клеточного ядра (рибонуклеопротеинов), составляют целое семейство (более 200 разновидностей) антинуклеарных (антиядерных) антител (АНА).

Семейство это носит название – антинуклеарный фактор или АНФ, хотя, следует заметить, с названиями иной раз возникает путаница, поскольку все же под термином «антинуклеарный фактор» подразумевают исследование сыворотки, обнаруживающее антинуклеарные антитела с участием метода непрямой иммунофлюоресценции (см. ниже).

И все же в настоящее время чаще принято говорить об антинуклерных антителах и методах их обнаружения. В норме АНА в организме не образуются, поэтому и нормы, как таковой, не существует.

Антинуклеарные антитела легко вступают во взаимодействие со всеми составляющими структурами клетки, запуская воспалительные реакции в органах и тканях, что отражается на их функциональных способностях. Естественно, у всех аутоиммунных заболеваний можно найти общие симптомы:

  • Суставные и мышечные боли;
  • Слабость;
  • Снижение массы тела;
  • Поражение кожных покровов.

Однако при этом каждая аутоиммунная болезнь наделена и своими специфическими симптомами.

Чаще всего антинуклеарный фактор назначается и выявляется в высоких титрах при системной красной волчанке (СКВ), присутствуя в сыворотке крови почти у всех пациентов (более 90%).

Однако сам позитивный ответ теста не доказывает формирование патологии, у людей здоровых людей, превосходно себя чувствующих, титр тоже может быть несколько повышен.

В данном случае специалист, который проводит исследование, определяет мишени АНА, чтобы впоследствии разработать правильную тактику в плане обследования пациента.

Таблица: встречаемость антинуклеарных антител при различных заболеваниях

Расшифровку исследования проводит специалист в области иммунологии (реже – ревматологии), который хорошо ориентируется в механизме образования антител и может провести дифференциальную диагностику, если в этом возникает необходимость. Для данного анализа самодеятельность абсолютно неуместна.

Причина назначения анализа и факторы, влияющие на результат

Как выше сказано, поиск АНФ в первую очередь находится в зоне внимания иммунолога и ревматолога, правда, врачи других специальностей тоже иной раз проявляют интерес к данному исследованию, однако он уже не столь велик, поскольку назначается тест, прежде всего, в случаях:

  1. Появления симптомов, указывающих на развитие аутоиммунного процесса, затрагивающего соединительную ткань (лихорадка в течение длительного периода, не отступающие суставные боли, снижение работоспособности, похудение, изменения со стороны кожи);
  2. Необъяснимого повышения показателей общего и биохимического анализа крови (увеличения СОЭ, концентрации СРБ – C-реактивного белка, и ЦИК – циркулирующих иммунных комплексов).

Врачи, занятые в области иммунологии и ревматологии используют исследование для:

  • Диагностики системной патологии соединительной ткани;
  • Дифдиагностики ряда ревматологических заболеваний, симптомы которых, как правило, схожи, но лечение – отличается;
  • Оценки эффективности проводимого лечения системных заболеваний соединительной ткани;
  • Мониторинга течения аутоиммунных процессов.

В иных случаях могут «выскакивать» ложноположительные или ложноотрицательные результаты.

Ложный плюс можно ожидать у пациентов:

  1. После 60-летнего возраста (до 35% случаев);
  2. Принимающих фармацевтические средства, которые при длительном применении сами по себе способны дать старт развитию системной красной волчанки. К ним относятся: некоторые антибиотики, сульфаниламиды, мочегонные группы тиазидов, гормональные противозачаточные средства, соли золота и лития, отдельные гипотензивные и многие другие препараты.

Наоборот, ложный минус можно получить при использовании таких гормонов, как дексаметазон, преднизолон, метипред (метилпреднизолон).

Следует заметить, что:

  • Разновидность болезни (системной красной волчанки) может быть АНФ-негативной (5%), поэтому при наличии симптомов данной патологии и отрицательном АНФ требуется дополнительное исследование – выявление АТ к SS-антигенам;
  • Нельзя воспринимать положительный результат, как неопровержимое доказательство заболевания – в сыворотке 5 – 10% здоровых людей описываемый показатель может быть повышен;
  • Полученные в ходе исследования результаты рекомендуется сопоставлять с данными клинической симптоматики и других лабораторных тестов – только комплексный подход способен установить точный диагноз;
  • В случае позитивного результата, полученного любым методом, необходимо подтверждение специфичности антинуклеарных антител иммуноблоттингом.

Хотя не особо мнительные люди, случайно пройдя подобное тестирование, могут не придавать своим результатам большого значения, продолжая жить полноценной активной жизнью.

Конечно, если не жалуются на свое здоровье.

А вот мнительные… Они – наоборот, могут даже и симптомы у себя найти, поэтому подобный анализ крови должен осуществляться только по назначению иммунолога, а не по собственной инициативе пациента.

Методы выявления АНА

Иммунологическая наука к изучению антинуклеарного фактора вплотную подошла к середине прошлого века, а с 1982 года, когда впервые была использована перевиваемая клеточная линия человека HEp-2, ставшая золотым стандартом обнаружения АНА, стали активно дорабатываться и добавляться другие методы. Сейчас иммунология и КДЛ используют несколько методик.

Метод непрямой иммунофлюоресценции, разработанный в самом начале 80-х (1982), на сей день считается наиболее популярным и доступным. Он предполагает участие HEp-2-клеток, извлеченных из опухоли гортани человека.

Для определения АНФ выявляются иммуноглобулины класса G (IgG), ибо представители иных классов особой роли не играют. Основа метода – соединение АНА с конкретными ядерными мишенями. Исследование проходит под люминесцентным микроскопом.

Расшифровка анализа проводится на основании полученных данных – тип свечения, титр АНА (норма – титр менее 1:160).

Рисунок: типы свечения и диагностические выводы

Метод двойной иммунодиффузии (качественный анализ) требует большой концентрации АНА, поэтому он менее чувствительный, нежели предыдущий метод. Однако данный недостаток с лихвой компенсируется высокой специфичностью.

К тому же, он простой, в какой-то специальной аппаратуре не нуждается, как и в применении антигенов высокой очистки.

Разновидность иммунодиффузии – контрэлектрофорез также является качественным методом, позволяющим увеличить чувствительность и сократить время проведения исследования.

Иммуноферментный анализ (ИФА) обладает высокой чувствительностью, обеспечивая быстрый и надежный количественный результат в лабораториях небольших медицинских учреждений.

Но при всех достоинствах у иммуноферментного анализа тоже есть свои недостатки: он требует контроля качества, поскольку стандартизация тест-систем и отображаемость результатов основаны на качестве данного исследования.

Возможности иммуноблоттинга в плане чувствительности и специфичности превосходят способности всех предыдущих методов.

Он отличается умением выявлять сывороточные АТ к антигенам определенного молекулярного веса, что позволяет не только найти редко встречающиеся антинуклеарные антитела, но и дать им полную характеристику.

И еще чем хорош иммуноблоттинг: он не нуждается в высокоочищенных антигенах и не требует контрольных и референсных реагентов. Но и этот метод, не глядя на свое превосходство над остальными, рекомендуется использовать не в изолированном виде, а вместе с другими методами (с целью повышения чувствительности).

Когда АНФ повышен

Преимущественно, в уточнении АНФ проявляет потребность подозрение на системную красную волчанку. Между тем, он повышен и при развитии других аутоиммунных состояний, кстати, иногда очень напоминающих СКВ, например:

  1. Наиболее распространенной разновидности красной волчанки – дискоидной форме, главными симптомами которой выступает поражение кожных покровов и слизистых оболочек. Эту форму нередко связывают с воздействием солнечных лучей, низких температур, инфекции, хотя причина ее остается невыясненной;
  2. Лекарственной волчанке, возникающей на фоне применения отдельных групп фармацевтических препаратов (антиаритмических, гипотензивных, противотуберкулезных, антибактериальных, противосудорожных и др.);
  3. Системной склеродермии, возникающей по неизвестным причинам, сопровождающейся разрастанием соединительной ткани (фиброз) с образованием рубцов, которые нарушают функционирование многих органов, а также поражением сосудистого русла на различных участках;
  4. Синдроме Шегрена, который, помимо того, что относится к СЗСТ, в числе симптомов имеет патологические изменения желез внешней секреции (преимущественно – слезных, слюнных);
  5. Синдроме Рейно, характеризующемся неадекватной реакцией (спазмом) сосудов в ответ на холод либо психоэмоциональное напряжение;
  6. Синдроме Шарпа, называемом смешанным заболеванием соединительной ткани;
  7. Ревматоидном артрите, что, в общем-то, понятно, ведь это тоже системная аутоиммунная патология;
  8. Патологических изменениях соединительной ткани диффузного характера – ДЗСТ (полимиозит);
  9. Туберкулезном процессе;
  10. Миастении с тяжелым течением;
  11. Васкулитах в стадии некротизирующего воспаления;
  12. Инфекционном мононуклеозе;
  13. Инфекционном эндокардите;
  14. Поражениях печени: хроническом гепатите аутоиммунного происхождения, биллиарном циррозе (первичном);
  15. Лейкозе, лимфоме и злокачественных опухолях других локализаций;
  16. Интерстициальных болезнях легких – ИБЛ (межуточном легочном фиброзе, рентгенологически и морфологически – «сотовое легкое»);
  17. Необратимых поражениях легких, связанных с профессиональной деятельностью (пневмокониоз).

Но лишь полное, всеобъемлющее обследование пациента может установить малоутешительный диагноз, с которым придется бороться всю дальнейшую жизнь. Или опровергнуть его.

АНФ, симптоматика и прочие лабораторные тесты

Позитивный антинуклеарный фактор обычно предполагает проведение ряда других лабораторных исследований.

Конечно, не обходится без общего анализа крови (ОАК), в котором основное внимание направлено на изменение скорости оседания эритроцитов (СОЭ) – она находится под постоянным контролем (анализ пациенты сдают чаще, нежели сам ОАК).

Периодически контролируется РФ (ревматоидный фактор), СРБ (С-реактивный белок – в количественном выражении), АСЛО (антистрептолизин О), антитела к кардиолипиновому антигену (IgG и IgM). Кроме этого, пациенту могут назначаться и более сложные тесты:

  • Скрининговые исследования, направленные на поиск АТ к двухнитевой ДНК (анти-dsDNA), к ядерным антигенам (ANA), к экстрагируемому ядерному антигену, то есть, к различным рибонуклеопротеинам (ENA-скрин);
  • Поиск антинуклеарных антител – IgG с помощью иммуноблоттинга (анти-Sm, RNP/Sm, SS-A, SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, dsDNA, CENT-B, Jo-1, к гистонам, к нуклеосомам, Ribo P, AMA-M2);
  • Определение содержания ЦИК (циркулирующих иммунных комплексов);
  • Исследование компонентов комплемента (С3 и С4).

Очевидно, как антинуклеарный фактор, так и все АНА могут появляться при многих и, следует заметить, довольно не простых патологических состояниях, поэтому и назначаются эти анализы крови только врачом, способным расшифровать и интерпретировать полученный результат.

Само исследование обычно не требует особой подготовки (как любой биохимический тест), кроме того, что пациент должен предупредить, какие лекарственные средства он принимает, чтобы врач обозначил время, когда можно сдавать анализ.

И еще: курящим пациентам за полчаса до отбора проб настоятельно рекомендуется расстаться со своей привычкой.

: специалист об антиядерных антителах – основное

Вывести все публикации с меткой:

Источник: https://sosudinfo.ru/krov/antinuklearnyj-faktor/

Антинуклеарный фактор на HEp-2 клетках, IgG

Антинуклеарный фактор (АНФ)

[13-045] Антинуклеарный фактор на HEp-2 клетках, IgG

1100 руб.

Метод исследования с использованием человеческих эпителиальных клеток HEp-2, который позволяет обнаружить антинуклеарные антитела – один из маркеров системных заболеваний соединительной ткани.

Синонимы русские

АНФ, антиядерные антитела, антинуклеарные антитела (АНА).

Синонимы английские

Antinuclear Antibodies (ANA), Hep-2 Substrate, ANA-Hep2, Fluorescent AntiNuclear Antibody detection (FANA).

Метод исследования

Непрямая реакция иммунофлюоресценции.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Определение антинуклеарного фактора (АНФ) является “золотым стандартом” выявления антинуклеарных антител (АНА) и диагностики аутоиммунных заболеваний.

Патогенез системных заболеваний соединительной ткани (СЗСТ) тесно связан с нарушениями в иммунной системе и повышенной выработкой антител к структурам собственных клеток.

Аутоантитела к компонентам ядра клеток – антинуклеарные антитела – взаимодействуют с нуклеиновыми кислотами и белками ядра, антигенами цитоплазмы, что проявляется воспалительными изменениями в тканях и органах, болями в суставах и мышцах, выраженным утомлением, потерей веса, кожными изменениями.

АНА обнаруживаются при многих аутоиммунных заболеваниях, но наиболее характерны для системной красной волчанки (СКВ). АНА встречаются более чем у 90  % больных системными заболеваниями соединительной ткани, в настоящее время описано около 200 разновидностей, которые объединены единым названием – антинуклеарный фактор.

При определении АНФ методом непрямой флюоресценции чаще используется перевиваемая линия эпителиальных клеток аденокарциномы гортани человека НЕр-2. Клетки НЕр-2 являются очень удобным субстратом для лабораторного исследования, так как обладают крупными ядрами и на стеклах растут в один слой. АНА выявляются при связывании с внутриклеточными антигенами клеток НЕр-2.

При исследовании эпителиальные клетки НЕр-2 выращивают на стеклах, фиксируют и инкубируют с разведенной сывороткой крови пациента. После удаления избытка сыворотки клетки инкубируют с меченными флюоресцеином антителами, затем снова промывают и исследуют с помощью флюоресцентного микроскопа.

При этом определяется титр антител и тип свечения. Диагностически значимым считается титр более 1:160. При обострении ревматических заболеваний он превышает 1:640, а в период ремиссии снижается до 1:160-1:320. Чем больше антител, тем выше титр.

По типу свечения можно установить мишени антинуклеарных антител, что имеет важное клиническое значение и определяет тактику дальнейшего обследования пациента. Основными являются периферический, гранулярный (мелко-/крупно-), ядрышковый, центромерный и цитоплазматический типы окрашивания ядра.

Каждому типу свечения присущи очень характерные признаки, которые позволяют отличить один вариант от другого.

Гомогенное (диффузное) окрашивание связано с наличием антител к двуспиральной ДНК, гистонам и характерно для СКВ и лекарственной волчанки.

Периферическое свечение обусловлено периферическим распределением хроматина в ядре, связано с антителами к ДНК и специфично для СКВ. Данный тип свечения важно дифференцировать от окрашивания ядерной мембраны, которое происходит при аутоиммунных заболеваниях печени.

Гранулярное (крапчатое, сетчатое) окрашивание встречается наиболее часто и является наименее специфичным, выявляется при многих аутоиммунных заболеваниях. Аутоантигенами в данном случае выступают нуклеопротеиновые комплексы в ядре (Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B антигены и PCNA).

Очень высокие титры АНФ с крупногранулярным типом свечения часто указывают на смешанное заболевание соединительной ткани.

Нуклеарное (ядрышковое) окрашивание обусловлено антителообразованием к компонентам ядрышка (PHК-полимераза-1, NOR, U3RNP, PM/Scl), выявляется при склеродермии, болезни Шегрена.

АНА иногда повышаются при эндокринных заболеваниях (сахарном диабете 1-го типа, тиреоидите, тиреотоксикозе, полиэндокринном синдроме), кожных заболеваниях (псориазе, пузырчатке), при беременности, после трансплантации органов и тканей, у больных на гемодиализе.

Центромерное свечение появляется при наличии антител к центромерам хромосом и характерно для формы склеродермии – CREST-синдрома.

Цитоплазматический тип свечения связан с антителами к тРНК-синтетазе, в частности к Jo-1, что характерно для дерматомиозита и полимиозита. Данный тип окрашивания также определяется при наличии антител к другим компонентам цитоплазмы при аутоиммунном гепатите, первичном билиарном циррозе.

Одновременное выявление различных типов свечения указывает на присутствие разных видов антител.

У здоровых людей может быть обнаружено мелкогранулярное свечение при низких, умеренных или высоких титрах АНА, но в норме крупнозернистые или гомогенные типы свечения не должны определяться.

В зависимости от результатов оценки типа свечения разрабатывается дальнейшая тактика лечения пациента и назначаются дополнительные исследования, уточняющие спектр АНА.

Для чего используется исследование?

  • Для диагностики системных заболеваний соединительной ткани.
  • Для дифференциальной диагностики ревматических болезней.
  • Чтобы оценить эффективность терапии аутоиммунных заболеваний.
  • Для наблюдения за течением системных заболеваний соединительной ткани.

Когда назначается исследование?

  • При симптомах аутоиммунного заболевания (длительное повышение температуры, боли в суставах, усталость, потеря массы тела, изменение кожных покровов).
  • При выявлении изменений, характерных для системных заболеваний соединительной ткани (повышение СОЭ, уровня С-реактивного белка, циркулирующих иммунных комплексов).

Что означают результаты?

Референсные значения

Результат: отрицательный.

Титр: 1:160.

Причины повышения титра АНФ на HEp-2 клетках:

  • cистемная красная волчанка (в 95  % случаев),
  • дерматомиозит/полимиозит,
  • системная склеродермия (в 60-90  % случаев),
  • синдром Шегрена (в 40-70  % случаев)
  • смешанное заболевание соединительной ткани (синдром Шарпа),
  • синдром Рейно,
  • дискоидная волчанка,
  • лекарственная волчанка,
  • ревматоидный артрит,
  • некротизирующий васкулит,
  • инфекционный мононуклеоз,
  • лейкемия,
  • злокачественные новообразования (преимущественно лимфома),
  • тяжелая миастения,
  • инфекционный эндокардит,
  • хронический аутоиммунный гепатит,
  • первичный билиарный цирроз печени,
  • туберкулез,
  • пневмокониоз,
  • интерстициальный фиброз легких.

Типы свечения

Тип свечения

Для чего он характерен

Гомогенный

Для СКВ, лекарственной волчанки, системной склеродермии, хронического активного гепатита

Периферический

Для СКВ

Гранулярный

Для СКВ, синдрома Шегрена, смешанной болезни соединительной ткани, ревматоидного артрита

Ядрышковый

Для полимиозита/дерматомиозита, склеродермии, синдрома Шегрена, СКВ

Центромерный

Для CREST-синдрома (кальциноза кожи, синдрома Рейно, эзофагеальной дисфункции, склеродактилии, телеангиоэктазии)

Цитоплазматический

Для дерматомиозита/полимиозита, аутоиммунного заболевания печени, первичного билиарного цирроза

Что может влиять на результат?

  • Ложноположительному результату способствует:
    • возраст старше 60-65 лет (в 10-37 % случаев);
    • применение лекарственных препаратов, которые могут привести к лекарственной волчанке (ацетазоламид, карбидопа, хлоротиазид, хлорпромазин, клофибрат, этосуксимид, соли золота, гризеофульвин, гидралазин, изониазид, соли лития, метилдопа, пероральные контрацептивы, пенициллин, фенилбутазон, фенитоин, примидон, прокаинамид, пропилурацил, хинидин, резерпин, стрептомицин, сульфаниламид, тетрациклин, тиазидные диуретики).
  • Прием глюкокортикостероидов (преднизолон, дексаметазон, метипред) иногда приводит к ложноотрицательному результату.

Важные замечания

  • В 5  % случаев СКВ возможен отрицательный результат данного анализа (АНФ-отрицательная СКВ). В таких ситуациях для уточнения диагноза необходимо определить антитела к SS-антигенам (Ro).
  • Положительный результат теста не является абсолютным доказательством наличия аутоиммунного заболевания. У здоровых людей в 3-13  % случаев титр АНФ повышен и достигает 1:320.
  • Результаты теста необходимо оценивать в комплексе с клиническими данными и другими лабораторными показателями.
  • При положительном результате исследования рекомендовано определить специфичность АНА иммуноблотом.

Также рекомендуется

  • Антитела к двухцепочечной ДНК (анти-dsDNA), скрининг
  • Антитела к ядерным антигенам (ANA), скрининг
  • Антитела к экстрагируемому ядерному антигену (ENA-скрин)
  • Антитела к кардиолипину, IgG и IgM
  • Антинуклеарные антитела, IgG (анти-Sm, RNP/Sm, SS-A, SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, dsDNA, CENT-B, Jo-1, к гистонам, к нуклеосомам, Ribo P, AMA-M2), иммуноблот
  • Общий анализ крови (без лейкоцитарной формулы и СОЭ)
  • Скорость оседания эритроцитов (СОЭ)
  • Антистрептолизин О
  • С-реактивный белок, количественно
  • Ревматоидный фактор
  • Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК)
  • С3 компонент комплемента
  • С4 компонент комплемента

Кто назначает исследование?

Ревматолог, иммунолог.

Литература

  • Wilson D. McGraw-Hill Manual of Laboratory and Diagnostic Tests 1st Ed Normal, Illinois, 2007: 55-57 pp.
  • Mariz HA, Sato EI, Barbosa SH, Rodrigues SH, Dellavance A, Andrade LE. Pattern on the antinuclear antibody-HEp-2 test is a critical parameter for discriminating antinuclear antibody-positive healthy individuals and patients with autoimmune rheumatic diseases. Arthritis Rheum. 2011 Jan;63(1):191-200.
  • Kumar Y, Bhatia A, Minz RW. Antinuclear antibodies and their detection methods in diagnosis of connective tissue diseases: a journey revisited. Diagn Pathol. 2009 Jan 2;4:1. PMID: 19121207 [PubMed].

Источник: https://helix.ru/kb/item/13-045

WikiMedikKonsult.Ru
Добавить комментарий